桿狀病毒-昆蟲細胞表達與純化服務

桿狀病毒-昆蟲細胞表達系統(BEVS)屬于真核表達系統的一種,該表達系統具有較高的安全性,并且基因組比較大,可以插入較大的外源基因,在大分子量的蛋白表達方面具有很大優勢。并且具有完備的翻譯后加工修飾和高效表達外源基因的能力。該系統由轉移載體、桿狀病毒載體和宿主細胞組成。該系統采用一個或多個桿狀病毒的超強啟動子,將外源目的基因插入到啟動子后,獲得重組病毒,這種重組病毒在昆蟲細胞復制的同時,使外源基因得到高效表達。BEVS被廣泛應用于病毒疫苗開發(如流感病毒和HPV疫苗開發)、信號蛋白制備、細胞因子制備、激酶開發等方面。
系統優勢
- 基因容量大,可攜帶較大的基因片段,表達大分子量蛋白有優勢;
- 安全性高,桿狀病毒具有嚴格的種屬特異性;
- 表達效率高,在被感染的晚期細胞中,蛋白可進行高效地表達;
- 表達產物的翻譯后修飾,尤其糖基化修飾與哺乳動物細胞類似,表達產物具有生物活性的可能性較高;
- 桿狀病毒較易擴增,可以大規模生產重組蛋白。
服務優勢
- 華美生物獨有的表達體系,可實現bacmid低成本、大體積懸浮轉染,且滴度高,可用于感染放大制備蛋白,較經典流程周期可縮短1-2周;
- 高性價比,價格低至6500元起;
- 貨期短:最短35工作日即可交付;
- 產量高,最高可達100mg/L。
我們承諾
注:該無風險定制蛋白服務僅適用于800個氨基酸以內的蛋白質。如果您需要表達超過800個氨基酸的蛋白質,我們將按步驟收費。
服務內容
步驟 | 服務項目 | 服務說明 | 華美生物特色 | 周期 | |
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1 | 質粒構建
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密碼子優化全基因合成 | 多載體優化 為了提高表達成功率以及獲得更高表達量,進行多信號肽優化,在確保純度的同時更大程度保證了蛋白的活性。 |
5-10工作日 | |
PCR擴增產物通過酶切連接到pFastbac1等載體上 | |||||
轉化TOP10宿主 | |||||
獲得測序正確的重組質粒 | |||||
2 | 重組Bacmid及高滴度病毒制備
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轉化DH10Bac構建重組Bacmid,PCR鑒定,提取Bacmid。 | 懸浮轉染 懸浮轉染方式大大提高了蛋白表達量,有效縮短實驗周期 |
12-15工作日 | |
重組Bacmid轉染昆蟲細胞,得到P0代病毒,電泳檢測表達量,如有需要再將P0代病毒感染細胞得到P1-P2代病毒 | |||||
3 | 擴大表達與純化
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P1或p2代病毒感染昆蟲細胞 | 優化表達 經過優化后,通過一步轉染培養最快5天內即可得到大量的目的蛋白,低代數的病毒毒液感染細胞即可得到大量目的蛋白 |
5-10工作日 | |
通過親和、離子交換、疏水及分子篩等多種層析方法純化目的蛋白 | |||||
4 | 其他(可選)服務
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收費 | 酶切去除標簽服務 | 靈活的附加服務 提供多種附加服務,客戶可根據實驗需求靈活選擇 |
3個工作日 |
免費 | 可提供無菌操作、內毒素去除和凍干等服務(備注:凍干與無菌操作不可同時滿足) | 2個工作日 | |||
5 | 質控
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進行純度、濃度等檢查,并提供QC報告 | 報告詳細 為每個項目提供產品說明書及完善的質控報告 |
3-5工作日 | |
總時間 | 25-40工作日 |
特色表達體系
● pFastbac1-KHM載體+sf9細胞高效表達
- 無縫克隆連接不懼任何內切酶位點;
- N端含有10xHis較常規6xHis在IMAC中具有更強結合能力,同時含有凝血酶位點,可通過酶切去除標簽得到無標簽蛋白;
- C端含有MYC-tag可應用于標簽抗體WB檢測,較His-tag具有更強靈敏度;
- Amp抗性篩選。
案例展示
案例1:昆蟲桿狀病毒表達系統高效表達蛋白
采用桿狀病毒-昆蟲細胞表達系統,該蛋白得到高效表達,細胞裂解液經過SDS-PAGE檢測即可看到明顯條帶,經過純化后檢測,該蛋白表達量高達20mg/L。

蛋白純化圖
泳道1:上樣后的穿透液
泳道2:細胞裂解液
泳道3:Marker
泳道4:30 mM咪唑洗脫液
泳道5:60 mM咪唑洗脫液
泳道6:250 mM咪唑洗脫液
案例2:昆蟲桿狀病毒表達系統表達大分子量蛋白
該項目目的蛋白較大,客戶選擇基因合成,載體構建,bacmid構建及后期的蛋白表達純化均在我公司完成,最后該蛋白成功在sf9細胞中表達,表達量達到5mg/L,純度達到95%,客戶收到該蛋白經過驗證后,對我們的產品質量非常滿意。

蛋白純化圖
泳道1:60 mM咪唑洗脫
案例3:昆蟲桿狀病毒表達系統表達小分子量蛋白
該蛋白分子量比較小,表達難度較高,采用我公司的pFastBac1-MBP載體進行融合表達后,融合蛋白成功表達,后經過酶切和二次純化后,目的蛋白純度達到95%。

蛋白純化圖
泳道1:融合蛋白酶切前
泳道2:融合蛋白酶切后
泳道3:二次純化后
聯系信息
電話:027-87002556


地址:武漢市東湖新技術開發區高新大道818號高科醫療器械園B11號2樓

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