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      1. Your Good Partner in Biology Research

        桿狀病毒-昆蟲細胞表達與純化服務

        桿狀病毒-昆蟲細胞表達系統(BEVS)屬于真核表達系統的一種,該表達系統具有較高的安全性,并且基因組比較大,可以插入較大的外源基因,在大分子量的蛋白表達方面具有很大優勢。并且具有完備的翻譯后加工修飾和高效表達外源基因的能力。該系統由轉移載體、桿狀病毒載體和宿主細胞組成。該系統采用一個或多個桿狀病毒的超強啟動子,將外源目的基因插入到啟動子后,獲得重組病毒,這種重組病毒在昆蟲細胞復制的同時,使外源基因得到高效表達。BEVS被廣泛應用于病毒疫苗開發(如流感病毒和HPV疫苗開發)、信號蛋白制備、細胞因子制備、激酶開發等方面。

        系統優勢

        • 基因容量大,可攜帶較大的基因片段,表達大分子量蛋白有優勢;
        • 安全性高,桿狀病毒具有嚴格的種屬特異性;
        • 表達效率高,在被感染的晚期細胞中,蛋白可進行高效地表達;
        • 表達產物的翻譯后修飾,尤其糖基化修飾與哺乳動物細胞類似,表達產物具有生物活性的可能性較高;
        • 桿狀病毒較易擴增,可以大規模生產重組蛋白。

        服務優勢

        • 華美生物獨有的表達體系,可實現bacmid低成本、大體積懸浮轉染,且滴度高,可用于感染放大制備蛋白,較經典流程周期可縮短1-2周;
        • 高性價比,價格低至6500元起;
        • 貨期短:最短35工作日即可交付;
        • 產量高,最高可達100mg/L。

        我們承諾

        無風險定制,不成功不收費

        注:該無風險定制蛋白服務僅適用于800個氨基酸以內的蛋白質。如果您需要表達超過800個氨基酸的蛋白質,我們將按步驟收費。

        服務內容

        步驟 服務項目 服務說明 華美生物特色 周期
        1 質粒構建
        密碼子優化全基因合成 多載體優化
        為了提高表達成功率以及獲得更高表達量,進行多信號肽優化,在確保純度的同時更大程度保證了蛋白的活性。
        5-10工作日
        PCR擴增產物通過酶切連接到pFastbac1等載體上
        轉化TOP10宿主
        獲得測序正確的重組質粒
        2 重組Bacmid及高滴度病毒制備
        轉化DH10Bac構建重組Bacmid,PCR鑒定,提取Bacmid。 懸浮轉染
        懸浮轉染方式大大提高了蛋白表達量,有效縮短實驗周期
        12-15工作日
        重組Bacmid轉染昆蟲細胞,得到P0代病毒,電泳檢測表達量,如有需要再將P0代病毒感染細胞得到P1-P2代病毒
        3 擴大表達與純化
        P1或p2代病毒感染昆蟲細胞 優化表達
        經過優化后,通過一步轉染培養最快5天內即可得到大量的目的蛋白,低代數的病毒毒液感染細胞即可得到大量目的蛋白
        5-10工作日
        通過親和、離子交換、疏水及分子篩等多種層析方法純化目的蛋白
        4 其他(可選)服務
        收費 酶切去除標簽服務 靈活的附加服務
        提供多種附加服務,客戶可根據實驗需求靈活選擇
        3個工作日
        免費 可提供無菌操作、內毒素去除和凍干等服務(備注:凍干與無菌操作不可同時滿足) 2個工作日
        5 質控
        進行純度、濃度等檢查,并提供QC報告 報告詳細
        為每個項目提供產品說明書及完善的質控報告
        3-5工作日
        總時間 25-40工作日

        特色表達體系

        ● pFastbac1-KHM載體+sf9細胞高效表達

        • 無縫克隆連接不懼任何內切酶位點;
        • N端含有10xHis較常規6xHis在IMAC中具有更強結合能力,同時含有凝血酶位點,可通過酶切去除標簽得到無標簽蛋白;
        • C端含有MYC-tag可應用于標簽抗體WB檢測,較His-tag具有更強靈敏度;
        • Amp抗性篩選。

        案例展示

        案例1:昆蟲桿狀病毒表達系統高效表達蛋白

        采用桿狀病毒-昆蟲細胞表達系統,該蛋白得到高效表達,細胞裂解液經過SDS-PAGE檢測即可看到明顯條帶,經過純化后檢測,該蛋白表達量高達20mg/L。

        蛋白純化圖

        泳道1:上樣后的穿透液
        泳道2:細胞裂解液
        泳道3:Marker
        泳道4:30 mM咪唑洗脫液
        泳道5:60 mM咪唑洗脫液
        泳道6:250 mM咪唑洗脫液


        案例2:昆蟲桿狀病毒表達系統表達大分子量蛋白

        該項目目的蛋白較大,客戶選擇基因合成,載體構建,bacmid構建及后期的蛋白表達純化均在我公司完成,最后該蛋白成功在sf9細胞中表達,表達量達到5mg/L,純度達到95%,客戶收到該蛋白經過驗證后,對我們的產品質量非常滿意。

        蛋白純化圖

        泳道1:60 mM咪唑洗脫


        案例3:昆蟲桿狀病毒表達系統表達小分子量蛋白

        該蛋白分子量比較小,表達難度較高,采用我公司的pFastBac1-MBP載體進行融合表達后,融合蛋白成功表達,后經過酶切和二次純化后,目的蛋白純度達到95%。

        蛋白純化圖

        泳道1:融合蛋白酶切前
        泳道2:融合蛋白酶切后
        泳道3:二次純化后

        聯系信息

          電話:027-87002556

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        武漢華美生物工程有限公司成立于2007年12月,是一家集科研、生產、銷售為一體的生物高新技術企業。并形成了以CUSABIO為品牌的ELISA試劑盒、蛋白、抗體等多種優質產品,遠銷歐美日德等九十多個國家。
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